ELISA комплекти антигендин же антителолордун катуу фазасына жана антигенди же антителону энзимге белгилөөгө негизделген. Катуу алып жүрүүчүнүн бетине байланышкан антиген же антитело дагы эле өзүнүн иммунологиялык активдүүлүгүн сактайт, ал эми антиген же антитело менен белгиленген фермент иммунологиялык активдүүлүгүн да, ферменттин активдүүлүгүн да сактайт. Аныктоо учурунда текшерилип жаткан үлгү (антитело же антиген өлчөнөт) катуу алып жүрүүчүнүн бетиндеги антиген же антитело менен реакцияга кирет. Катуу ташыгычта пайда болгон антиген-антитело комплекси жууп суюктуктагы башка заттардан бөлүнөт.
Фермент менен белгиленген антигендер же антителолор кошулат, алар да реакция аркылуу катуу ташуучу менен байланышат. Бул убакта катуу фазадагы ферменттин саны үлгүдөгү заттын көлөмүнө пропорционалдуу болот. Ферменттик реакциянын субстратын кошкондон кийин, субстрат түстүү продуктуларга айлануу үчүн фермент тарабынан катализделет. Продукциянын көлөмү үлгүдөгү текшерилген заттын көлөмүнө түздөн-түз байланыштуу, ошондуктан түстүн тереңдигине жараша сапаттык же сандык анализ жүргүзүлүшү мүмкүн.
Ферменттердин жогорку каталитикалык эффективдүүлүгү иммундук жооптун натыйжаларын кыйыр түрдө күчөтүп, анализди өтө сезгич кылат. ELISA антигендерди аныктоо үчүн колдонулушу мүмкүн, бирок антителолорду аныктоо үчүн да колдонсо болот.
ELISA комплектинин негизги принциптери
Ал объектти ферментке туташтыруу үчүн антиген менен антителонун спецификалык реакциясын колдонот, андан кийин сандык аныктоо үчүн фермент менен субстраттын ортосунда түс реакциясын жасайт. Өлчөөнүн объектиси антитело же антиген болушу мүмкүн.
Бул аныктоо ыкмасы үчүн зарыл болгон үч реагент бар:
â Катуу фазадагы антиген же антитело (иммундук адсорбент)
â¡ Энзим менен белгиленген антиген же антитело (маркер)
⢠ферменттин таасири үчүн субстрат (түстү өнүктүрүү агенти)
Өлчөөдө антиген (антитело) адегенде катуу алып жүрүүчү менен байланышат, бирок дагы эле өзүнүн иммундук активдүүлүгүн сактайт, андан кийин антитело (антиген) менен ферменттин конъюгаты (маркери) кошулат, ал дагы эле өзүнүн баштапкы иммундук активдүүлүгүн жана ферментин сактап калат. активдүүлүк. Конъюгат катуу алып жүрүүчүдөгү антиген (антитело) менен реакцияга киргенде, ферменттин тиешелүү субстраты кошулат. Башкача айтканда, каталитикалык гидролиз же REDOX реакциясы жана түсү.
Ал чыгарган түстүн көлөкөлөрү өлчөнө турган антигендин (антитело) көлөмүнө пропорционалдуу. Бул түстүү продукт жылаңач көз менен байкоого болот, оптикалык микроскоп, электрондук микроскоп, ошондой эле спектрофотометр (фермент этикеткасы аспап) менен өлчөөгө болот. Метод жөнөкөй, ыңгайлуу, тез жана конкреттүү.